Manual practico para la deteccion electroforetica de isoenzimas y otras proteinas

Véase GEN (QP 519 .9 .E434 H8)

Se describen los procedimientos para la deteccion electroforetica de isoenzimas y proteinas presentes en materiales de yuca, frijol y leguminosas. Se detallan por medio de graficas la construccion y ensamble del equipo necesario para llevar a cabo electroforesis con gel de almidon y con gel de poliacrilamida y la electroforesis de proteinas. Se describen en detalle la preparacion de la gel de almidon y de poliacrilamida, las soluciones tampon, las soluciones para la preparacion de las muestras. Se especifican procedimientos de corte, tiempos de aplicacion de voltajes, voltajes y procedimientos para coloracion de las principales enzimas evaluadas (fosfatasa acida, catalasa, esterasa, fumarasa y peroxidasa). La electroforesis de proteinas es un procedimiento mas sencillo, dado que las bandas proteinicas no estan influenciadas por los artefactos utilizados en los procedimientos de extraccion o el estado fisiologico del material vegetal. Se pueden extraer por medio de estos metodos las proteinas totales, proteinas solubles en agua (albuminas), proteinas solubles en sal (globulinas), proteinas solubles en alcohol (gliadinas), proteinas solubles en acido acetico (gluteninas), proteinas insolubles o residuales. El procedimiento en general para la extraccion de las proteinas consiste en hacer mezclas de cloruro de sodio 0.4 N y centrifugar hasta conseguir la proteina deseada; se describe la electroforesis en geles de poliacrilamida basica y la acida. Se presenta un analisis de evaluacion de los patrones electroforeticos, el cual puede ser mediante la comparacion con muestras de identidad conocida o medicion de la intensidad visual. (CIAT)

Procedures for the electrophoretic detection of isoenzymes and other proteins contained in cassava, beans, and legumes are described. Diagrams illustrating the construction and assembly of equipment required to conduct starch gel and polyacrylamide gel electrophoresis and protein electrophoresis are included. The preparation of the starch and polyacrylamide gels, buffer solutions, and sample solutions is described in detail. Procedures for sample cutting, voltage application time and values, and staining of the main enzymes under study (acid phosphatase, catalase, esterase, fumarase, and peroxidase) are specified. Protein electrophoresis is a much simpler procedure, since protein bands are not influenced by the equipment used in extraction procedures or by the physiological state of the plant material. Total proteins, water-soluble proteins (albumins), salt-soluble proteins (globulins), alcohol-soluble proteins (gliadins), acetic acid-soluble proteins (glutenins), and insoluble or residual proteins can be extracted by these methods. The general procedure for protein extraction consists in mixing 0.4 N sodium chloride and centrifuging until the desired protein is obtained; electrophoresis using basic and acid polyacrylamide gels is described. An analysis is presented of electrophoretic patterns, which can be made by using samples of known identity or through visual intensity measurements. (CIAT)