Infectious mutants of cassava latent virus generated in vivo from intact recombinant DNA clones containing single copies of the genome

Se informa sobre el potencial de producir infeccion sistemica en plantas utilizando clones recombinantes intactos y se caracterizaron un no. de ADN virica de progenies. Se encontro que los ADN recombinantes intactos que contenian copias unicas de cualquier componente del genoma del virus latente de la yuca desencadenaron la infeccion cuando fueron inoculados mecanicamente en las plantas hospedantes en la presencia de un segundo componente apropiado. La caracterizacion de los virus mutantes infecciosos de la progenie, mediante el analisis de los estados intermedios del ADN en espiral especificos al virus, indico que casi todo, si no todo, el vector en clonacion habia sido suprimido, lo cual se logro por lo menos en algunos casos por recombinacion intermolecular in vivo entre los ADN 1 y 2. Las reorganizaciones significativas dentro de la region intergenica del ADN 2, predominantemente externas a la region comun, pueden tolerarse sin perdida de la infectividad sugiriendo un papel mas bien pasivo en la multiplicacion del virus para las secuencias en cuestion. Aunque las limitaciones en el tejido de relleno pueden limitar la cantidad de ADN dentro de particulas gemelas, el aislamiento de un mutante infeccioso de la proteina de cubierta, defectuosa en la produccion del virion, sugiere que el relleno no es esencial para la diseminacion sistemica del ADN virico. (RA-CIAT)

The potential to produce systemic infection in plants using intact recombinant clones is reported and a no. of progeny viral DNAs are characterized. Intact recombinant DNAs containing single copies of either component of the CLV genome were found to elicit infection when mechanically inoculated to host plants in the presence of the appropriate 2nd component. Characterization of infectious mutant progeny viruses, by analysis of virus-specific supercoiled DNA intermediates, indicated that most if not all of the cloning vector has been deleted, achieved at least in some cases by intermolecular recombination in vivo between DNAs 1 and 2. Significant rearrangements within the intergenic region of DNA 2, predominantly external to the common region, can be tolerated without loss of infectivity suggesting a somewhat passive role in virus multiplication for the sequences in question. Although packaging constraints might impose limits on the amount of DNA within geminate particles, isolation of an infectious coat protein mutant defective in virion production suggests that packaging is not essential for systemic spread of the viral DNA. (AS)