Anthocyanidins and flavonols, major nod gene inducers from seeds of a black-seeded common bean (Phaseolus vulgaris L.)

Once compuestos liberados de semillas en germinacion de frijol negro cv. PI165426CS inducen la transcripcion de genes nod en Rhizobium leguminosarum bv. phaseoli. Se identificaron aglicones de 10 de esos compuestos mediante metodos espectroscopicos (visible/ultravioleta, resonancia magnetica nuclear de protones y espectroscopia de masas), y se demostro su actividad biologica mediante la induccion de la actividad de beta-galactosidasa en cepas de R. leguminosarum que contenian fusiones nodA-lacZ o nodC- lacZ controladas por los genes nodD de R. leguminosarum bv. phaseoli. Comparaciones con las normas autenticas confirmaron las estructuras quimicas (por presencia de aglicones) de las 10 moleculas como antocianidinas (delfinidina, petunidina y malvidina) y flavonoles (miricetina, quercetina y kaempferol). Las antocianidinas y los flavonoles mostraron grupos de 3-0- glicosilacion y grupos libres de hidroxilo en las posiciones 4 prima, 5 y 7. Los expt. con hidrolisis revelaron que la concn. requerida para lograr la mitad de la induccion max. de genes nod (l50) por los 10 glicosidos era aprox. la mitad de la de los resp. aglicones. El valor l50 medio para las 3 antocianidinas (360 nanomolar) fue inferior (P menor que o igual a 0.05) que el de los 3 aglicones de flavonol (980 nanomolar). Cada semilla libero aprox. 2500 nanomoles de antocianidina y 450 de flavonoles inductores de genes nod en las formas conjugadas durante las primeras 6 h de imbibicion. Con base en la cantidad y actividad de los compuestos liberados, las antocianidinas aportaron aprox. 10 veces mas actividad inductora total de nod que los glicosidos de flavonol. Estas antocianidinas de las semillas de frijol constituyen los primeros compuestos inductores de nod identificados a partir de ese grupo de flavonoides. (RA-CIAT) spa

Eleven compounds released from germinating seeds of a black- seeded bean (Phaseolus vulgaris L., cv. PI165426CS) induce transcription of nod genes in Rhizobium leguminosarum biovar phaseoli. Aglycones from 10 of those compounds were identified by spectroscopic methods (ultraviolet/visible, proton nuclear magnetic resonance, and mass spectroscopy), and their biological activities were demonstrated by induction of beta-galactosidase activity in R. leguminosarum strains containing nodA-lacZ or nodC-lacZ fusions controlled by R. leguminosarum biovar phaseoli nodD genes. By making comparisons with authentic standards, the chemical structures for aglycones from the 10 molecules were confirmed as being anthocyanidins (delphinidin, petunidin, and malvidin) and flavonols (myricetin, quercetin, and kaempferol). All anthocyanidins and flavonols had 3-O-glycosylation and free hydroxyl groups at the 4 prime, 5, and 7 positions. Hydrolysis experiments showed that the mean concentration required for half- maximum nod gene induction (l50) by the 10 glycosides was about half that of the corresponding aglycones. The mean l50 value for the three anthocyanidins (360 nanomolar) was less (P less than or equal to 0.05) than that of the three flavonol aglycones (980 nanomolar). Each seed released approximately 2500 nanomoles of anthocyanidin and 450 nanomoles of flavonol nod gene inducers in conjugated forms during the first 6 hours of imbibition. Based on amounts and activities of the compounds released, anthocyanins contributed approximately 10-fold more total nod-inducing activity than flavonol glycosides. These anthocyanidins from bean seeds represent the first nod-inducing compounds identified from that group of flavonoids. (AS) eng